成人呼吸道感染类型多样，不同感染类型及不同基础疾病患者病原谱各具特点。传统微生物学及免疫学技术对呼吸道病原体检测的灵敏度偏低，核酸检测技术的发展和临床应用大幅提高了呼吸道病原体的诊断能力。

中华检验医学培训工程专家委员会联合中华医学会呼吸病学分会组织我国多学科专家共同撰写了 《成人呼吸道感染病原诊断核酸检测技术临床应用专家共识 ( 2023) 》，分析了实时荧光聚合酶链反应 ( polymerase chain reaction，PCR) 技术、等温扩增技术、数字PCR技术、核酸即时检测技术和病原体高通量测序技术的临床应用场景、技术特点和性能验证要求。

呼吸道病原体核酸检测方法

实时荧光PCR技术

性能验证要求

定量检测需验证的性能指标应包括: 正确度、精密度 ( 包括测量重复性和测量中间精密度) 、不确定性、特异度 ( 包括抗干扰能力) 、灵敏度、检出限、定量限、线性区间 ( 可报告区间) 等。定性检测需验证的性能指标包括: 方法符合率、检出限、抗干扰能力、交叉反应等，具体性能指标以产品说明书要求为准。

等温扩增技术

性能验证要求

通常等温扩增为定性实验，需满足中国合格评定国家认可委员会 GL039定性实验的验证要求: 符合率≥90% ; 阴性和弱阳性样本精密度检测结果完全一致; 参照厂家说明进行靶基因检测，5 次重复检测均应检出，20 次重复检测应检出至少 18 次。

数字PCR技术

性能验证要求

定量检测性能验证指标应包括: 反应单元体积精密度、准确度、有效率; 样本检测重复性、线性、动态范围、灵敏度。应使用泊松分布计算靶标分子拷贝数，不同荧光通道之间应不存在相互干扰。基于芯片的数字PCR芯片内应无气泡，阳性和阴性的随机分布应得到视觉确认。微滴数字 PCR单次反应生成的最小液滴数应符合厂商建议或用户自定义值。

核酸 POCT 技术

性能验证要求

定性检测性能验证指标应包括: 符合率≥90% ;阴性和弱阳性样本精密度检测结果完全一致; 靶基因5 次重复检测均应检出，20 次检测应至少检出 18 次。

定量检测性能验证指标应包括: 至少 80% 的样本结果偏倚在±7. 5% 区间内; 批内和批间精密度满足说明书范围; 线性区间满足说明书范围; 20 次检测中≥18 个检测结果与参考值之间的偏倚在±7. 5%区间内。

病原体高通量测序技术

性能验证要求

实验室在开展病原体高通量测序临床检测前，需参考实验室自建方法的相关要求完成方法学建立和性能确认，结合预期临床用途确立预期性能指标，应包括: ( 1) 生信流程评估: 最低测序数据量、准确率、召回率、精确率和 F1 值等; ( 2) 全流程性能确认:背景核酸数据模型、阳性阈值、重复性、最低检测限、抗干扰力、稳定性等; ( 3) 临床评估: 对一定数量的真实临床标本进行检测，确定阴性预测值和阳性预测值。

菁良传染病质控品

菁良科技根据国内外病原检测对于质控品的需求，开发多款细菌真菌的灭活菌液质控品和DNA/RNA类的灭活病毒质控品。

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参考文献

中华检验医学培训工程专家委员会, 中华医学会呼吸病学分会. 成人呼吸道感染病原诊断核酸检测技术临床应用专家共识(2023)[J]. 协和医学杂志, 2023, 14(5): 959-971. doi: 10.12290/xhyxzz.2023-0338