HotStart mTTx DNA/RNA Polymerase
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| TTx DNA聚合酶源于Tth DNA聚合酶，而逆转录活性较Tth DNA聚合酶大幅提高，在优化的反应Buffer中，TTx表现出卓越的RT-PCR特性，但TTx DNA Polymerase的活性仍然依赖于对PCR有抑制活性的Mn2+，这种专用的反应Buffer系统限制了TTx应用的拓展性。mTTx DNA/RNA聚合酶经电子重构架技术，改变了TTx的活性配体中心，使其在Mg2+条件下仍然具有极强的逆转录活性。mTTx DNA/RNA Polymerase在Mg2+条件下对于DNA模板和RNA模板扩增能力几乎无偏差，这种独有的特性使得mTTx不再受限于反应Buffer系统，增加了其应用的拓展性，使得多种类型的实验得以实现，包括：采用单酶进行TaqMan RT-PCR、在单管相同的Buffer系统中对RNA和DNA进行多重检测、超多重的RNA模板扩增、RNA的NGS建库、高保真RT-PCR扩增等。 | ||||||||||||||||||||
主要特征 |
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单位定义 |
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| 一个活力单位即在在68°C条件下，30分钟内催化10 nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。 | ||||||||||||||||||||
储存 |
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| -20℃可保存3年，避免反复冻融。 | ||||||||||||||||||||
使用方法（以mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix为例） |
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| 1. 按以下组分配制RT-qPCR反应液 2×mTTx MasterMix 10 μl 上游引物（10 μM） 0.4 μl 下游引物（10 μM） 0.4 μl 荧光探针（10 μM） 0.2 μl RNA X μl ddH2O Up to 20 μl 注意：引物和探针的使用浓度可在0.1-0.8ul直接调整。 2. Direct One-Step RT-PCR程序 92℃ 5 min (热启动) 60℃ 5 min (逆转录) 92℃ 10 s 60℃ 30 s（收集信号） 循环35-45次 注意：mTTx的最佳变性温度为92℃，其它温度条件都会导致试剂性能下降。逆转录步骤的温度可根据实际情况在58-70℃调整。 |
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实例展示 |
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| 1. 以2019新冠病毒N基因体外转录RNA直接作为模板，应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标RNA进行TaqMan qPCR扩增，结果表明不同拷贝数的RNA，扩增性能良好。 | ||||||||||||||||||||
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| 2. 应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix对不同拷贝的目标DNA和RNA进行TaqMan qPCR扩增，结果表明该产品对DNA模板和RNA模板扩增几乎无偏差，RNA模板比DNA模板更容易检出。 | ||||||||||||||||||||
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| 3.将不同数量的Jurkat细胞直接加入到TaqMan PCR反应体系中，应用mTTx RNA Probe RT-qPCR MasterMix进行内参基因GAPDH的TaqMan qPCR扩增。 | ||||||||||||||||||||
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