细胞计数仪对于做动物细胞培养的老师而言，可以算是最简单又常用的分析仪器之一了。但看似简单的细胞计数仪，也可能让使用者为之抓狂。
曾收到一位做工艺开发的老师反馈，他使用的一款细胞计数仪三次检测同一个样品，每次分析结果和平均值的偏差都超出正常可接受范围。
这么简单的仪器为何会出现这种问题
是否是仪器本身的性能问题
在此，我们希望通过本文对细胞计数结果的重复性和准确性介绍，以及如何检测来帮助老师排查使用的仪器性能。对于性能不达标的老仪器，就可以考虑设备的更新了。
关于重复性和准确性，我们可以通过下图所示的Precision和Accuracy来理解。如果重复性好，那连续几次测试结果比较集中，与平均值相比的偏差都比较小。而准确性则是和真实值进行比较，多次测试结果和真实值的偏差越小，说明测试准确性越好。
如果您手头已有细胞计数仪在使用，如何来判定这款细胞计数仪的重复性和准确性呢？
根据《定量细胞计数方法性能的实验设计和统计分析（ISO20391-2:2019）》一文中，关于细胞计数方法性能判定的实验设计，建议至少做4个浓度梯度，每个浓度梯度至少做3次重复性测试。我们可以考虑使用该方法来评判手上细胞计数仪的性能好坏，具体的细胞选择和样品制备上可以参考ISO20391-2:2019里面的具体描述。
在此，我们拿Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪和另一款半自动插板式细胞计数仪分别进行细胞计数的重复性和准确性的性能评估。
这里检测用到的是一种肿瘤细胞，按4个浓度梯度稀释（原液，2倍，5倍和10倍稀释），并且每个浓度做3组重复性检测，以下是测试得到的结果和统计数据。
针对同一个样品的4个不同稀释倍数和3组重复性检测，同时使用半自动细胞计数仪（通常需要使用细胞计数板作为载体，同时台盼蓝染色需要手动完成）检测是怎样的效果呢？如下表所示是一款半自动细胞计数仪上检测得到的数据。
由于半自动细胞计数仪装机后很久未做过标样的验证和校准，所以和全自动细胞计数仪的测试结果之间的差异在此不做比较分析。
为了能比较得出这两台细胞计数仪的重复性和准确性的性能水平，我们将每台仪器3次原液检测（编号：S3-原液）得到的活细胞密度平均值作为“真值”。那么Vi-CELL BLU得到的“真值”是3.44M，而半自动细胞计数仪得到的“真值”是3.06M。而其他3个稀释倍数下计算得到的平均结果，都分别和这个“真值”进行比较，并且计算得到相对偏差。
通过分析我们可以看到随着S3样品的稀释倍数不断增加，Vi-CELL BLU的活细胞密度平均值偏差也逐渐变大，但都在±10%的偏差范围内。同时每个稀释倍数下的3次重复性检测RSD都小于5%，显示出良好的测试结果重复性。
而半自动细胞计数仪对5倍和10倍稀释的样品检测，3次测试结果的相对标准偏差已经大于10%，并且稀释10倍的活细胞密度平均值和原液“真值”结果比较，偏差达到了15.03%。所以，半自动细胞计数仪的重复性检测上相对要差很多，并且随着稀释倍数增加，检测得到的结果和原液结果之间的偏差加大。
通过以上这种性能检测方法，我们可以得出无论是在3次测试的重复性，还是梯度稀释结果的准确性，Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪都比半自动细胞计数仪更有优势。如果您对自己使用的细胞计数仪性能感兴趣，也可以尝试用这个方法来检测判断。
至于为何Vi-CELL BLU全自动细胞计数仪在重复性检测和梯度稀释的测试准确性上，都比半自动插片式细胞计数仪更有优势？下一期的内容，我们将针对这个问题为您做具体的介绍。