Baricitinib巴瑞替尼 （LY3009104; INCB028050） 是选择性，可口服的 JAK1 和 JAK2 抑制剂，IC50 分别为5.9 nM 和 5.7 nM。

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　　Baricitinib巴瑞替尼的生物活性

　　体外研究

　　在基于细胞的检测中，Baricitinib巴瑞替尼 （INCB028050）被证明是JAK信号通路和功能的有效抑制剂。在PBMCs中，Baricitinib巴瑞替尼抑制il -6刺激的典型底物STAT3的磷酸化（pSTAT3）和随后的趋化因子MCP-1的产生，IC50值分别为44 nM和40 nM。在分离的naive t细胞中，INCB028050也能抑制IL-23刺激的pSTAT3 （IC50=20 nM）。重要的是，这种抑制抑制了Th17细胞产生的两种致病细胞因子（IL-17和IL-22），其IC50值为50 nM。Th17细胞是一种辅助T细胞的亚型，具有明显的炎症和致病特性。与之形成鲜明对比的是，结构相似但无效的JAK1/2抑制剂INCB027753和INCB029843在浓度高达10 μM[1]时对这些检测系统没有显著影响。[]

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

　　体内研究

　　Baricitinib巴瑞替尼 (INCB028050) 处理在 2 周处理期间以 1 mg/kg 的剂量抑制后爪体积增加 50%，以 3 或 10 mg/kg 的剂量抑制 >95%。由于基线爪体积测量是在处理第 0 天进行的-在具有明显疾病迹象的动物中-有可能在动物中具有 >100% 的抑制，显示出肿胀的显著改善[1]。

　　Baricitinib巴瑞替尼 (0.7 mg/kg/天) 处理的小鼠表现出显著减少的炎症 (通过 H&E 染色评估)、CD8 浸润减少以及 MHC I 类和 II 类表达减少。CD8+NKG2D+ 细胞是小鼠和人类斑秃 (AA) 疾病的关键效应细胞，与载体对照小鼠相比，Baricitinib巴瑞替尼 处理的小鼠显著减少[2]。

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　　实验参考方法

　　细胞试验[1]

　　为了测定il -6诱导的MCP-1的产生，PBMCs在RPMI 1640+10% FCS中每孔3.3×105 cell电镀，在不同浓度的INCB028050 （1 nM、10 nM、100 nM、1 μM和10 μM）存在或不存在的情况下进行。在室温下与复合物预孵育10分钟后，每孔加入10 ng/mL人重组IL-6刺激细胞。细胞在37°C, 5% CO2孵育48小时。收集上清液，用ELISA法分析人MCP-1的水平。据报道，INCB028050抑制il -6诱导的MCP-1分泌的能力为50%抑制所需的浓度（IC50）。使用Cell-Titer Glo[1]对Ba/F3-TEL-JAK3细胞进行3 d以上的增殖。[1]

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　　动物实验[1][2]

　　老鼠[1]

　　雌性大鼠（每组性别n=6只）给予10 mg/kg的Baricitinib巴瑞替尼，并以10 mL/kg的剂量灌胃。前3只大鼠在给药前0、2、8、24 h放血，后3只大鼠在给药后1、4、12 h放血。用EDTA作为抗凝剂，样品离心获得血浆。已经开发了一种定量测定INCB028050的分析方法，并用于毒理学研究样品的分析。该方法结合了10%甲醇在乙腈中沉淀提取蛋白质和LC/MS/MS分析。该方法使用0.1 mL研究样品，在1-5000 nM范围内具有线性关系。使用分析师1.3.1处理数据。使用加权线性回归（1/x2）从峰面积比与浓度之间确定标准曲线。

　　老鼠[2]

　　实验采用AA的C3H/HeJ移植受体小鼠模型。简单地说，将自发脱发的C3H/HeJ小鼠的脱发皮肤移植到8-10周无疾病的C3H/HeJ小鼠上。在移植时，植入一个渗透泵，给予约0.7 mg/天的Baricitinib巴瑞替尼或安慰剂。渗透泵每月更换一次。对间隔截尾数据进行了时间-事件生存分析。R中的生存和间隔包用于执行log-rank测试。（n=10） baricitinib治疗的小鼠和（n=10）安慰剂治疗的小鼠的生存分布相等的假设在5%水平上被拒绝，使用Sun的分数执行一个精确的log-rank - two-sample检验，p值为0.0035。

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　　参考文献

　　[1]. Fridman JS, et al. Selective inhibition of JAK1 and JAK2 is efficacious in rodent models of arthritis: preclinical characterization of INCB028050. J Immunol. 2010 May 1;184(9):5298-307.

　　[2]. Jabbari A, et al. Reversal of Alopecia Areata Following Treatment With the JAK1/2 Inhibitor Baricitinib巴瑞替尼. EBioMedicine. 2015 Feb 26;2(4):351-5.