AAT 研发的新型钙离子荧光探针 点亮你的科研之路-自主发布-资讯-生物在线

AAT 研发的新型钙离子荧光探针 点亮你的科研之路

作者:西安百萤生物科技有限公司 2018-12-19T09:34 (访问量:2357)

AAT 研发的新型钙离子荧光探针 点亮你的科研之路

简介

Calbryte™520,Calbryte™590和Calbryte™630提供最强大的均匀荧光测定工具,用于检测细胞内钙动员。与现有的钙指示剂(如Fluo-3 AM,Fluo-4 AM和Rhod-2 AM)相比,这些钙敏感染料明显更亮,并提供更高的信噪比,大大提高了细胞内保留和负载效率。表达通过钙发出信号的GPCR或钙通道的细胞可以预装载穿过细胞膜的CalbryteTM520 AM,CalbryteTM590 AM或CalbryteTM630 AM。一旦进入细胞内,Cal520®AM,Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM的亲脂性阻断AM基团被细胞内酯酶切割,产生带负电荷的荧光Calbryte™染料,留在细胞内。它们与钙结合后的荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时,该受体表达细胞内钙的释放,这显着增加了Calbryte™520,Calbryte™590或Calbryte™630的荧光。高灵敏度和>100倍荧光增强的特性使Calbryte™520 AM,Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM是测量细胞内钙的最强大指标。

除了方便的激发波长和钙的大荧光增强外,Calbryte™520,Calbryte™590和Calbryte™630主要定位于细胞溶胶中,不像Rhod-2主要位于线粒体中。此外,Calbryte™590和Calbryte™630的Ex/Em波长使这些染料成为完美的钙指示剂,可与绿色荧光蛋白(GFP)细胞系进行多色检测。此外,Calbryte™520,Calbryte™590或Calbryte™630钙测定经过优化,可与大多数现有荧光仪器兼容。Calbryte™520可在488nm处激发,并与FITC滤光片组配合使用。Calbryte™590经过优化,可在555nm激发,并与TRITC/Cy3滤光片组配合使用。Calbryte™630经过优化,可在594 nm激发,并与TexasRed®滤光片组配合使用。光谱和钙结合特性总结如下(参见表1)。

1.Calbryte™520,Calbryte™590或Calbryte™630

试剂的光谱和Ca2+结合特性

Ca2+ Indicator

Excitation(nm)

Emission(nm)

Kd(uM)

Calbryte520

492nm

514nm

1.2

Calbryte590

580nm

592nm

1.4

Calbryte630

608nm

624nm

1.2

使用Calbryte™520 AM ,Calbryte™590 AM 或Calbryte™630 AM酯类

1.使用Calbryte™520,Calbryte™590或Calbryte™630 AM酯类称重传感器:

Calbryte™AM酯应在使用前在无水DMSO中重新配制。DMSO储备溶液可以在-20℃下储存(干燥)并避光。在这些条件下,AM酯应稳定三个月。

以下是我们推荐的将Calbryte™520 AM,Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM酯加入活细胞的方案。 该说明仅提供指南,应根据您的特定需求进行修改。

a)在无水DMSO中制备2至5mM CalbryteTM520AM,CalbryteTM590 AM或CalbryteTM 630 AM酯的储备溶液。

b)CalbryteTM520 AM,CalbryteTM590 AM或CalbryteTM630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Calbryte™520 AM,Calbryte™590 AM或Calbryte™630 AM酯的水溶性。 各种Pluronic®F-127解决方案可从AAT Bioquest获取。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)添加到染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)

注意:各种ReadiUse™丙磺舒(包括水溶性钠盐和稳定溶液)均可从AAT Bioquest获取。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育约60分钟,然后将板在室温下再孵育15分钟。

f)用HHBS或您选择的含有阴离子转运蛋白抑制剂(如1 mM丙磺舒)的缓冲液替换染料工作溶液,以去除多余的染料。

g)对于CalbryteTM520 AM,在Ex/Em=490/525nm处进行钙测试,对于CalbryteTM590 AM,使用540/590nm进行钙测试,对于CalbryteTM630 AM,使用610/640nm进行钙测试。

名称

货号

规格

价格

新型钙离子荧光探针Calbryte™ 530, AM

20720

2x50 ug

2340

新型钙离子荧光探针Calbryte™ 590, AM

20700

2x50 ug

2340

新型钙离子荧光探针Calbryte™-520L AM

20640

10x50 ug

3540

新型钙离子荧光探针Calbryte™ 630, AM

20721

10x50 ug

4740

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